【摘要】目的：了解人乳头瘤病毒（ HPV ）在男性包皮炎和女性宫颈炎患者中的感染状况与感染型别。方法： 56 例包皮炎和 492 例宫颈炎患者患处取标本后采用 PCR 方法检测 HPV6 、 11 、 16 和 18 型。结果：包皮炎和宫颈炎患者的 HPV DNA 阳性率分别为 42.9%(24/56) 和 31.9%(157/492),HPV 易感人群以 20~40 岁感染率最高。结论：包皮炎与宫颈炎患者的 HPV 感染可能与阴茎癌、宫颈癌的发生有密切关系。
　　 【关键词】人乳头瘤病毒；包皮炎；宫颈炎
　　 人乳头瘤病毒（ human papillomavims,HPV ）是尖锐湿疣的病原体，目前已鉴定出 100 多个型别，已肯定其特征的型别达 70 种以上，其中 HPV16 、 18 型感染与宫颈癌、阴茎鳞癌及前列腺癌发展关系密切 [1] 。包皮炎与慢性宫颈炎是我国男性与妇女生殖器官炎症中较常见的疾病，易复发，不易治愈，有癌变倾向。因此，检测包皮炎与宫颈炎患者生殖器官感染 HPV 的状况，对于生殖器官炎症的早期诊断及宫颈癌与阴茎癌的早期发现和预防，有重要意义。本研究采用 PCR 方法，检测了 56 例包皮炎患者与 492 例宫颈炎患者的 HPV 感染状况，现报告如下：
　　 1.  材料与方法
　　 1.1 病例选择
　　 2001 年 3 月至 2002 年 4 月在我院就诊的患有生殖器官炎症的男女患者，其中包皮炎患者 56 例，宫颈炎患者 492 例，均参照临床诊断标准。
　　 1.2 标本收集与处理
　　 包皮炎患者翻起包皮后用无菌棉拭子擦拭炎症部位，宫颈炎患者用无菌棉拭子取宫颈口及后穹隆处分泌物粘液，放入装有 2ml 生理盐水的消毒试管中漂洗。 5000r ? min -1 离心 10mm ，弃上清，沉淀中加入 40 μ lHPV 裂解液和 2 μ l10g/L 的蛋白酶 K ， 55 ℃水浴 1 h 后， 100 ℃沸水浴 10 min ，然后 15000 r ? min -1 离心，取上清 8 μ l 待检。
　　 1.3 引物设计
　　 HPV6 和 1 型引物：上游引物为 5 ′ -CGTCCA/CAA/GA/GGGAA/TACTGATC-3 ′、下游引物为 5 ′ -CTGTGG-TAGATACCACA/TCGCAGTAC-3 ′； HPV16 型引物：上游引物为 5 ′ -TCAAAAGCCACTGTGTCCTG-3 ′下游引物为 5 ′ -CGTGTTGTTGATGATCTGCA-3 ′； HPV18 型引物：上游引物为 5 ′ -TGCCAGAAACCGTTGAATCC-3 ′、下游引物为 5 ′ -TCTGAGTCGCTTAATTGCTC-3 ′； HPV 通用型引物：上游引物为 5 ′ -GCA/CCAGGGA/TCATA-AC/TAATGG-3 ′、下游引物为 5 ′ -CGTCCA/CAA/GA/GGGAA/TACTGATC-3 ′。 HPV11 和 16 型引物位于基因 E1 区， HPV16 引物位于 E6 区， HPV18 引物位于 E7 区， HPV 通用引物位于 6 、 11 、 16 和 18 的 L 1 区。引物生物工程技术服务有限公司合成。
　　 1.4 PCR 扩增
　　 反应体积为 50 μ l，反应体系如下：ddH 2 O15μl，10×缓冲液 50 μ l.dNTPs(10nmol/L) 4μl,各型分别上、下游引物各为 2 μ l（5.0nmol/L），上述处理标本 8 μ l，Taq酶2U，混匀后加50μl石蜡油。扩增条件为：94℃40s,58℃(或55℃或50℃)30s，72℃50 s。30个循环，最后72℃延伸5min。PCR仪为美国PE公司9600型。反应完成后，取PCR产物10μl在2%琼脂糖凝胶上电泳，溴化乙锭染色，并于紫外透射仪下观察结果 [3] 。
　　 2.  结果
　　 2.1 包皮炎患者的HPV检测结果
　　 56例包皮炎患者中HPV DNA检出24例，阳性率为42.9%。其中HPV6型感染1例（1.8%），HPV11型感染6例（10.7%），HPV16型感染8例（14.3%）,HPV18型感染14例（25.0%）,其中HVP11型与HPV16型复合感染1例，HPV16型与HPV18型复合感染2例，HPV11、16与18型复合感染2例。
　　 2.2 宫颈炎患者的HPV检测结果
　　 492例宫颈炎患者中HPV DNA检出157例，阳性率为31.9%。其中HPV6型感染5例（1.1%），HPV11型感染38例（7.7%），HPV16型感染83例（16.9%），HPV18型感染88例（17.9%），其中HPV16型复合感染9例，HPV16型与HPV18型复合感染25例，HPV11、16与18型复合感染23例。
　　 2.3 HPV感染的年龄频度
　　 548例包皮炎与宫颈炎患者中HPV DNA检出181例，阳性率为33.0%，以20～40岁的年龄段感染率最高（表2）。
　　 3．讨论
　　 HPV 感染生殖器后，可不引起生殖器组织明显病变，也可无临床症状，称为亚临床或隐性感染。而另一些 HPV 感染后，可导致上皮增生和生疣，其中 HPV6 、 11 、 16 、 18 型与临床关系密切， 6 型与 11 型属低危型别，在良性尖锐湿疣中多见， 16 型与 18 型属高危型别，在男女生殖器癌中多见。 HPV16 或其它高危 HPV 感染， 28% 的持久性疣体可能出现恶变，而且 HPV16 能潜伏在生殖器和口腔粘膜中，并可由母亲直接传给婴儿，危害较大 [2] 。｝
　　 本研究中， 56 例包皮炎患者 24 例有不同的 HPV 型别感染，检出率为 42.9% ，与侯炜等 [4] 报道的 41.7% 相似，各个型别的检出率及复合感染也基本相似，但该研究检出 HPV6 型感染 1 例；在 492 例宫颈炎患者 157 例有不同的 HPV 型别感染，检出率为 31.9% ，与马建伟等 [5] 报道的 29.7% 相似， HPV16 及 18 型的检出率及复合感染也基本相似，并检出 HPV6 型感染 5 例。值得注意的是，在男性包皮炎患者和女性宫颈炎患者中均存在 HPV11 、 16 及 18 型的二重或三重感染，提示在临床工作中，要重视 HPV 的亚临床感染，若能尽早治疗，可预防尖锐湿疣和生殖器癌的发生。
　　 从就诊的性别上来看，男女比例相差悬殊，说明女性发病率高于男性，但从 HPV 的检出率来看，男性却高于女性（ P<0.05 ），原因有待于研究。从年龄构成来看， 548 例包皮炎与宫颈炎患者中 HPV DNA 的阳性检出率以 21~40 岁的年龄段率最高，占 66.8% ，其次是 11~20 岁年龄组，占 13.2% ，可见有年轻化的倾向，提示 HPV 感染的预防应及早开始。
　　 参考文献
　　 [1]Mandelblatt JS,Lawrence WF,Womack SM,et al. Benefits and costs of using HPV testing to screen for cervical cancer[J].JAMA,2002,287(18):2372-2318.
　　 [2]Wright TC,Cox JT,Massad LS,et al.Consensus guidelines for the management of women with cervical cytological abnormalities[J].JAMA,2002,287(16):2120-2129.
　　 [3] 杜江，邱庆林，梁巧明等 247 例人乳头瘤病毒的 PCR 检测结果分析 [J]. 微生物学免疫学进展， 1998 ， 26 （ 2 ）： 40-41.
　　 [4] 侯炜，马胜利，杨占秋等，包皮中人乳头瘤病毒基因的检测 [J]. 基础医学与临床， 2001,21(5):474-476.
　　 [5] 马建伟，张淼发，杜小伟，等 . 子宫颈人乳头瘤病毒 PCR 检测及临床意义的研究 [J]. 中国公共卫生， 1999 年， 15 （ 5 ）： 410-411
　　 表 ① 包皮炎与宫颈炎患者的 HPV 不同型别检出率（ % ） 
      分类    总阳性率   HPV6   HPV11   HPV16   HPV18 
     包皮炎    42.9      1.8    10.7    14.3     25.0 
     宫颈炎    31.9      1.1     7.7    16.9     17.9 
　　表 ② HPV 感染的年龄频度 
     年龄（岁）    1~10  11~ 20  21~ 30  31 ~ 40  41~ 50  51~ 60   60~ 
      感染人类      0      24      63       58      18      10      8 
   百分比（ % ）    0     13.2    34.8     32.0     9.9     5.3    4.4